小腸結腸炎耶(yé)爾(ěr)森氏(shì)菌是(shì)引起(qǐ)人(rén)類胃腸(cháng)炎,腸(cháng)係膜淋(lín)巴(bā)結(jié)炎甚至敗(bài)血症(zhèng)的(dí)重要食源(yuán)性(xìng)病(bìng)原(yuán)體,尤(yóu)其(qí)在(zài)低溫(wēn)環境下仍可(kě)緩慢增殖,具有“嗜冷(lěng)”特性。為實(shí)現(xiàn)快(kuài)速,準確(què)檢測(cè),小(xiǎo)腸結腸炎耶爾(ěr)森氏(shì)菌(jūn)顯色(sè)培養(yǎng)基因(yīn)其高選(xuǎn)擇性與(yǔ)直(zhí)觀(guān)判讀優(yōu)勢被廣(guǎng)泛采用。然而,其檢(jiǎn)測(cè)效能高度依賴於前期樣品(pǐn)處理(lǐ)方(fāng)式是否與其兼容。若前處理(lǐ)不當(dāng),可(kě)能導(dǎo)致(zhì)目標菌(jūn)被抑製(zhì),非目標菌(jūn)過度生長(cháng)或目標(biāo)菌數量(liáng)不(bù)足(zú),從而造成(chéng)假陰性或假陽性(xìng)。因(yīn)此,充分理(lǐ)解(jiě)並優(yōu)化(huà)樣品前處理與顯(xiǎn)色培(péi)養(yǎng)基(jī)的(dí)兼容(róng)性,是(shì)保障(zhàng)檢測可(kě)靠性(xìng)的(dí)關鍵環節(jié)。
一,不(bù)同樣本(běn)類(lèi)型(xíng)的前處(chǔ)理差異(yì)
臨(lín)床樣本(běn)(如糞便)通(tōng)常含(hán)有大量正常(cháng)菌群,需通過選擇性增(zēng)菌提高(gāo)耶爾森氏菌比(bǐ)例。常用方法(fǎ)包括(kuò)在(zài)磷(lín)酸(suān)鹽(yán)緩衝(chōng)液進(jìn)行25–28℃冷增菌18–48小時(shí),以(yǐ)抑製(zhì)大腸(cháng)杆(gān)菌等中(zhōng)溫菌,同(tóng)時(shí)促(cù)進耶(yé)爾森(sēn)氏菌生(shēng)長。此(cǐ)增(zēng)菌液可(kě)直接(jiē)劃(huá)綫接種至(zhì)顯色培(péi)養基(jī),兼容(róng)性良好。
食(shí)品(pǐn)樣本(如豬肉(ròu),乳製品,生鮮蔬菜)則需先均質化(huà),並(bìng)根據(jù)基質(zhì)復雜(zá)程度選擇(zé)是否進行前增(zēng)菌,再轉接至(zhì)選擇性增菌液。高脂肪(fáng)或(huò)高蛋白(bái)食(shí)品可(kě)能幹擾(rǎo)顯色(sè)反應,因此(cǐ)前處(chǔ)理(lǐ)中應充(chōng)分(fēn)離心或過濾,減少(shǎo)雜質對培(péi)養基pH及顯(xiǎn)色底(dǐ)物(wù)的影響。
環(huán)境(jìng)水(shuǐ)樣(如(rú)河(hé)水,加(jiā)工用(yòng)水)因目標(biāo)菌濃(nóng)度(dù)極(jí)低,通常(cháng)需大體(tǐ)積過濾濃縮(suō),再將濾(lǜ)膜放入增菌(jūn)液中培(péi)養。此(cǐ)類(lèi)前(qián)處理產生的樣本(běn)液成分較(jiào)潔(jié)淨,對(duì)顯(xiǎn)色(sè)培(péi)養(yǎng)基幹(gān)擾小(xiǎo),但需(xū)注意濾膜殘留消毒(dú)劑(jì)(如(rú)氯(lǜ))可(kě)能(néng)抑(yì)製(zhì)細菌(jūn)生長,必(bì)要(yào)時(shí)添加中和劑(如硫代*)。
二,前處理對顯色培養(yǎng)基(jī)性能(néng)的(dí)影(yǐng)響(xiǎng)
顯色培(péi)養(yǎng)基依(yī)賴(lài)特定(dìng)酶(méi)切(qiē)割顯(xiǎn)色底(dǐ)物產生顏色(sè)。若幹擾(rǎo)物(wù)質(zhì)(如(rú)食(shí)品(pǐn)色素,膽汁(zhī)鹽(yán)殘留,抗生(shēng)素代(dài)謝物)進入(rù)培養體係,可能抑(yì)製酶活(huó)性或改變菌(jūn)落背景(jǐng)色,導(dǎo)致誤判。例(lì)如,未經(jīng)充(chōng)分稀(xī)釋的(dí)糞(fèn)便(biàn)懸液直接(jiē)接種,可(kě)能(néng)因(yīn)高(gāo)濃度膽鹽(yán)抑製(zhì)耶爾(ěr)森氏菌生(shēng)長,使其無(wú)法形(xíng)成(chéng)典(diǎn)型(xíng)洋紅色(sè)菌落(là)。
此外,前處理中使(shǐ)用(yòng)的抗生素雖(suī)能抑(yì)製(zhì)革(gé)蘭氏(shì)陽(yáng)性菌(jūn)和部(bù)分革蘭氏陰(yīn)性(xìng)菌,但(dàn)若殘留(liú)量(liáng)過(guò)高,可能(néng)對耶爾森(sēn)氏(shì)菌(jūn)本身產生輕微(wēi)抑(yì)製(zhì),延緩顯(xiǎn)色時間(jiān)。因(yīn)此,劃(huá)綫前(qián)建議(yì)適(shì)當稀釋(shì)增菌液或(huò)采(cǎi)用中和(hé)步(bù)驟。
三(sān),標(biāo)準化與(yǔ)驗(yàn)證(zhèng)的(dí)重要(yào)性(xìng)
為(wéi)確(què)保兼容性,前處理(lǐ)流程(chéng)應盡量(liáng)遵循標準方法(fǎ)。這些方法已驗證(zhèng)其(qí)與主流顯色(sè)培養(yǎng)基(jī)(的(dí)匹(pǐ)配性(xìng)。實驗室若自行(háng)優(yōu)化前處理(lǐ)條(tiáo)件(如(rú)縮短(duǎn)增菌(jūn)時間,更換緩(huǎn)衝液),需(xū)進(jìn)行(háng)加(jiā)標回收實驗,驗證(zhèng)目標(biāo)菌回(huí)收(shōu)率與顯色特異性是(shì)否(fǒu)達標(biāo)。
四(sì),操作建議
所有(yǒu)樣(yàng)本增(zēng)菌後(hòu)應充分(fēn)混匀再取樣接種;
避免將(jiāng)高濃度原(yuán)始(shǐ)樣(yàng)本直接塗(tú)布顯色平(píng)板(bǎn);
對復(fù)雜(zá)基質樣本(běn),建議(yì)設置未接種對(duì)照(zhào)平(píng)板(bǎn),觀察(chá)背景幹擾;
記(jì)錄(lù)前處理參數(shù)(溫度,時間,稀(xī)釋倍數(shù)),便於(yú)結(jié)果(guǒ)溯源。
綜上所述,小腸(cháng)結腸炎耶爾森(sēn)氏菌顯色培(péi)養(yǎng)基雖具(jù)備優(yōu)異的識(shí)別能(néng)力,但(dàn)其效能發揮(huī)離不(bù)開科學,規範的樣品(pǐn)前處(chǔ)理。隻有(yǒu)根(gēn)據(jù)樣本(běn)類(lèi)型合理選(xuǎn)擇(zé)增菌(jūn)策(cè)略(lüè),控製幹擾因(yīn)素,並與(yǔ)標準方法(fǎ)保(bǎo)持(chí)一致,才(cái)能保(bǎo)持顯色(sè)培(péi)養基的(dí)靈(líng)敏度與(yǔ)特異性,為(wéi)食(shí)品安全(quán)與(yǔ)臨(lín)床(chuáng)診斷提供(gōng)可靠依據。