產(chǎn)碳青(qīng)黴烯酶(méi)的操(cāo)作法(fǎ)則
產(chǎn)碳青(qīng)黴(méi)烯酶作(zuò)為細菌(尤其(qí)是革蘭(lán)陰性(xìng)杆(gān)菌)主(zhǔ)要耐(nài)藥機製(zhì),自1982年英(yīng)國(guó)從粘質沙雷菌(jūn)中分離出碳青(qīng)黴(méi)烯酶(méi)以來(lái),已陸續(xù)報(bào)道70餘種碳青(qīng)黴(méi)烯酶。由於產(chǎn)酶編碼基因位於(yú)染(rǎn)色體或質粒上,可以快速整合至細(xì)菌中,特(tè)別(bié)是臨(lín)床分離的銅綠(lǜ)假(jiǎ)單(dān)胞菌,鮑曼不動杆菌(jūn),肺炎克(kè)雷(léi)伯(bó)菌和大腸埃希(xī)菌(jūn)對碳(tàn)青黴烯類抗生(shēng)素耐藥(yào)率不(bù)斷增(zēng)高(gāo),給臨(lín)床(chuáng)治療和(hé)醫(yī)院(yuàn)感(gǎn)染防控帶來巨大的(dí)挑戰(zhàn)。
產(chǎn)碳青黴烯酶(méi)具有很廣泛的水解(jiě)底(dǐ)物譜(pǔ),臨床一旦遇(yù)到產(chǎn)該(gāi)酶(méi)的菌株,很難(nán)治療,目前尚無有效(xiào)藥(yào)物。進行聯合(hé)藥敏(mǐn)試(shì)驗,或進行聯合抗菌藥(yào)治(zhì)療。目前(qián)已(yǐ)報道的可檢測產碳(tàn)青(qīng)黴烯(xī)酶(méi)的方(fāng)法(fǎ)主要有EDTA協同試驗,改良Hode試(shì)驗,三維(wéi)試(shì)驗(以亞(yà)胺培南替(tì)代頭孢(bāo)西丁,其餘(yú)操作相同(tóng))以(yǐ)及Etest法(fǎ)。
操作:
1,基(jī)礎(chǔ)培養(yǎng)基(jī):取(qǔ)瓶內(nèi)幹(gān)粉(fěn)42.5g溶(róng)於1000mL去(qù)離(lí)子水的潔淨三(sān)角(jiǎo)瓶(píng)中,移取2.0ml增補劑(jì)S1加入到(dào)培(péi)養基(jī)內,充(chōng)分攪拌混匀。也(yě)可(kě)根據(jù)需要按照(zhào)42.5g/L和2.0ml/L的(dí)比(bǐ)例擴(kuò)大或(huò)縮(suō)小製(zhì)備(bèi)培(péi)養基的(dí)量(liáng)。
2,加熱(rè)至100℃,不停攪拌(bàn),使(shǐ)其*溶(róng)解。若(ruò)使用(yòng)微(wēi)波爐加熱(rè),應(yīng)將培養(yǎng)基(jī)加(jiā)熱沸騰,立(lì)即(jí)移出(chū),輕(qīng)輕搖匀,再放(fàng)入(rù)微波爐加熱,觀(guān)察(chá)小氣泡變為大(dà)氣(qì)泡,直至*溶解(jiě)即(jí)可(kě)。切(qiē)勿使(shǐ)培養(yǎng)基(jī)溢(yì)出(chū)。
3,增補劑S2:取(qǔ)增補劑(jì)S20.25g溶於2.0ml無(wú)菌去離子(zǐ)水(shuǐ)中(zhōng),攪拌(bàn)均匀(yún),過濾(0.45um濾膜(mó))備用(yòng)。也可(kě)根據(jù)需(xū)要按(àn)照(zhào)0.25g/L的比(bǐ)例(lì)擴大(dà)或縮小(xiǎo)製備增補劑的(dí)量(liáng)。
4,將溶解(jiě)*的增(zēng)補劑S2加(jiā)入(rù)到(dào)冷(lěng)卻至45℃~50℃的(dí)基(jī)礎培(péi)養基和增(zēng)補劑(jì)S1中(zhōng),輕(qīng)輕地(dì)搖動(dòng)均匀(yún),配(pèi)製成產(chǎn)碳青黴烯酶的顯色培(péi)養基(jī),傾注平(píng)皿(mǐn),使其凝(níng)固,晾(liàng)幹(gān)備用。
保(bǎo)存該成品(pǐn)平(píng)板(bǎn)在(zài)室(shì)溫可(kě)保存一天或在(zài)冰(bīng)箱內貯(zhù)存(cún)1個(gè)月(yuè)(2℃~8℃,避光)。