質粒中(zhōng)提(tí)試劑盒是一種(zhǒng)用(yòng)於(yú)從大腸杆(gān)菌(jūn)等(děng)細菌(jūn)中快速，高效(xiào)提取(qǔ)中量質(zhì)粒DNA的試(shì)劑盒，適(shì)用於多(duō)數(shù)細胞轉(zhuǎn)染(rǎn)實(shí)驗(yàn)，文(wén)庫篩選(xuǎn)，體外翻譯等常(cháng)規分(fēn)子生物學(xué)操(cāo)作。
 

　　質(zhì)粒中提試劑盒操作(zuò)步驟(zhòu)(以(yǐ)常見試劑盒為例)

 

　　細菌收集(jí)：取(qǔ)5-30ml過夜(yè)培(péi)養的菌液，加(jiā)入離心(xīn)管中，使(shǐ)用常(cháng)規台(tái)式離心機離心(xīn)，盡量吸(xī)除上清。
 

　　細(xì)胞裂解：向有菌體沉澱的(dí)離心管中(zhōng)加入(rù)重(zhòng)懸液(如Solution I)，懸浮細(xì)菌沉澱(diàn)。然(rán)後加(jiā)入(rù)裂解液(如(rú)Solution II)，溫(wēn)和地(dì)上下(xià)翻(fān)轉(zhuǎn)使(shǐ)菌體充(chōng)分(fēn)裂解(jiě)。此時菌液應變得(dé)清(qīng)亮粘稠。
 

　　中和(hé)與沉澱(diàn)：加入(rù)中(zhōng)和(hé)液(yè)(如(rú)Solution III)，立(lì)即溫和地(dì)上下翻(fān)轉(zhuǎn)充(chōng)分混(hùn)匀，此(cǐ)時將出現白(bái)色絮(xù)狀沉(chén)澱。離(lí)心(xīn)後(hòu)，將(jiāng)上(shàng)清液轉移到(dào)吸附柱(zhù)中(zhōng)。
 

　　DNA吸附與洗脫(tuō)：將(jiāng)上(shàng)清液(yè)加(jiā)入吸附柱中，離(lí)心後(hòu)棄(qì)廢液。然後加(jiā)入漂(piāo)洗(xǐ)液(yè)(如DNA Wash Buffer)進(jìn)行漂(piāo)洗，以去除殘(cán)留的雜質(zhì)。最(zuì)後(hòu)，將吸(xī)附柱置(zhì)於(yú)幹淨的離(lí)心管(guǎn)中，加(jiā)入洗脫緩衝(chōng)液(yè)(如Elution Buffer)進(jìn)行洗脫(tuō)，收集(jí)質粒(lì)DNA溶液(yè)。