厭氧菌及棒狀杆菌鑒定(dìng)卡由20個具(jù)幹(gān)燥底(dǐ)物的(dí)小(xiǎo)管組(zǔ)成,可用於測(cè)定(dìng)酶活(huó)性(xìng)和糖(táng)的發酵(jiào)。酶活性測定將濃的(dí)菌懸(xuán)液(yè)接(jiē)種(zhǒng)於(yú)幹(gān)燥的酶底(dǐ)物(wù),使(shǐ)其復(fù)溶。孵(fū)育過(guò)程(chéng)中(zhōng),所(suǒ)產生的(dí)代(dài)謝終(zhōng)產物(wù)通過(guò)自然反(fǎn)應或加入附(fù)加(jiā)試劑而(ér)變色。發酵試(shì)驗(yàn)將(jiāng)菌(jūn)懸(xuán)液(yè)接種於(yú)營養培(péi)養(yǎng)基(jī)中(zhōng)(含(hán)pH指(zhǐ)示劑),使(shǐ)管內(nèi)底物溶解。糖發酵(jiào)結果(guǒ)由pH 指示劑的變化而測(cè)得。鑒定(dìng)結(jié)果(guǒ)可(kě)根據說明(míng)書的判讀表(biǎo)進(jìn)行(háng)讀出(chū),也可(kě)參(cān)照生化譜檢(jiǎn)索(suǒ)手冊或測定(dìng)軟件,得(dé)到鑒定(dìng)結果。
厭氧(yǎng)菌及棒狀杆(gān)菌(jūn)鑒(jiàn)定(dìng)卡(qiǎ)程序性(xìng)步驟:
1.菌落的(dí)選(xuǎn)取(qǔ),一旦要鑒(jiàn)定(dìng)的菌株(zhū)被分離並被證實為革蘭氏(shì)陽(yáng)性(xìng),無(wú)芽孢(bāo)形(xíng)成(chéng),兼(jiān)性(xìng)需氧-厭氧杆(gān)菌(jūn)杆(gān)菌:
1.1 記錄溶血類型
1.2 挑取一個分離(lí)較(jiào)好菌(jūn)落(là)於(yú)0.3ml 的(dí)無菌水中製(zhì)備均匀菌懸(xuán)液。
1.3 用(yòng)該懸(xuán)液注(zhù)入瓊脂平(píng)板中(zhōng)【Trypcase Soy 瓊脂(zhī)+5%羊血(xiě)平板(bǎn)或哥(gē)倫比(bǐ)亞(yà)瓊(qióng)脂(zhī)(加(jiā)或不(bù)加CAN)+5%羊(yáng)血平(píng)板上】(或用(yòng)拭子塗(tú)布(bù)整(zhěng)個平(píng)板表麵)。
1.4 37°C 孵(fū)育(yù)24 – 48 小時
2.試條的準備
2.1 準備一個培養(yǎng)盒(盤(pán)和蓋(gài)子(zǐ)),倒入(rù)約(yuē)5ml 蒸餾(liù)水或去離子水(shuǐ)【或(huò)任(rèn)何不(bù)含(hán)添加(jiā)劑或(huò)不含(hán)能產生(shēng)揮(huī)發性(xìng)氣(qì)體(tǐ)(如Cl2,CO2 等)的化學物質(zhì)的水】於(yú)盤的(dí)蜂(fēng)窩(wō)小凹(āo)中,造(zào)成一個濕室。
2.2 記(jì)錄菌株(zhū)資料於(yú)盤(pán)的(dí)長(cháng)邊上(不記在蓋上,因(yīn)為操作過(guò)程(chéng)中(zhōng)很(hěn)容易(yì)將(jiāng)蓋(gài)子放到(dào)其它(tā)試條上)。
2.3 從(cóng)包裝(zhuāng)袋中(zhōng)取出試條。
2.4 置試(shì)條(tiáo)於培養(yǎng)盒(hé)中。
3.接種物(wù)的製(zhì)備(bèi)
3.1 按(àn)產(chǎn)品(pǐn)說(shuō)明(míng)書(shū)中(zhōng)“警(jǐng)告(gào)和(hé)注意”所示(shì),打開API 懸浮(fú)培養基(jī)安瓿。
3.2 用拭子收集所有先前準備好(hǎo)的(dí)傳(chuán)代(dài)平(píng)板上的細菌(jūn)。建議使用(yòng)培(péi)養24-48 小(xiǎo)時(shí)的新(xīn)鮮菌(jūn)。
3.3 製(zhì)備菌懸液,濃(nóng)度(dù)為(wéi)6 個(gè)麥氏單位(wèi)。菌懸液(yè)製備(bèi)好後應(yīng)立(lì)即(jí)使用。